成都CD63外泌体慢病毒包装

寻找肝脏疾病的新型分子标志物一直是研究热点，也是难点。不同肝脏疾病中，细胞分泌的外泌体所携带的核酸和蛋白组分之间存在差异。这些不同生理状态下外泌体所携带的特异性蛋白分子、miRNA等，是潜在的分子诊断和预后标志物。肝细胞患者中，血清外泌体miR-21、-18a、-221、-222和miR-224明显上升，miR-101、-106b、-122和miR-195明显下降。而HCC患者肝移植复发后，血清外泌体miR-718水平明显下降。除外泌体外，微泡也有可能作为新型标志物，研究发现HCV患病者中CD4+和CD8+T细胞来源的微泡含量上升；而肝脏干细胞分泌的微泡中多种miRNAs上调。外泌体又存在检测时需使用大量外泌体和难以检测到低表达水平的标记蛋白。成都CD63外泌体慢病毒包装

外泌体起源于多泡体,以细胞管腔内囊泡的形式存在.细胞的胞吞形成带有外源性抗体的内体小泡,在高尔基体等细胞器的作用下形成早期核内体,早期核内体的囊膜内陷、突入形成多个小囊泡,并选择性的接受细胞内的蛋白质、核酸、脂类等成分,较终形成晚期核内体,晚期核内体与细胞膜融合,并将外泌体排出胞外。这是一个连续而又复杂的过程,从内体小泡到成熟外泌体,需要在各细胞器间传递并包装,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神经酰胺、胆固醇等。外泌体的排出跟其他胞内小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的调控,敲除细胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌体不能排出,且从高尔基体到晚期核内体的囊泡运输不受影响。外泌体命名从症状患者树突状细胞释放的外泌体中，含有各种症状细胞来源的蛋白质。

通过对28例前列腺ai症患者和19例正常人尿液外泌体中的miRNA进行深度测序分析，发现两种miRNA(miR-196a-5p和miR-501-3p)在前列腺ai患者组明显下调，表明尿液外泌体中的特异性miRNA可能作为前列腺ai的新型生物标志物。Khurana等［100］将研究对象由miRNAs扩大至多种类型RNA，通过对慢性肾病患者尿液外泌体中各类RNA进行系统研究，在慢性肾病患者组中识别出30种明显差异的lncRNAs，表明尿液外泌体中的lncRNAs具有作为慢性肾病早期诊断标志物的潜力。Skotland等的研究则表明尿液外泌体中的脂质能够作为前列腺ai的新型标志物，3种脂质标志物结合使用能够有效提高对前列腺ai的诊断灵敏度(93%)和特异性(100%)。

Knepper等通过对透射电镜得到的200个囊泡进行粒径分析，结果表明尿液中外泌体的粒径分布约为35～40nm，磷脂双分子层厚度约为直径的1/5～1/10。透射电镜结合免疫金标记法能够得到外泌体表面特征分子的信息，有助于揭示外泌体的产生机制与来源。动态光散射(dynamiclightscattering，DLS)和纳米颗粒跟踪分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis，NTA)都是利用光学手段获得囊泡粒径分布的方法。两者的不同之处在于动态光散射通过检测散射光的强度计算得到颗粒粒径，而纳米颗粒跟踪分析通过追踪单个粒子的运动轨迹计算得到样品浓度、粒径分布等信息。在抗原呈递细胞中的外泌体发挥作用的报道后，人们对外泌体的兴趣增强。

外泌体（Exosome）介导瘤血管的形成和转移。外泌体（Exosome）能将自身的细胞因子IL-8和VEGF释放到细胞外，作用于内皮细胞膜表面受体，导致瘤血管快速形成并较终通过发生EMT过程促进瘤的迁移。瘤细胞来源的外泌体（Exosome）中含有血管生长素、血管内皮生长因子等，这些细胞因子以不同的作用方式促进瘤血管的形成，如VEGF通过唤醒磷酸酯酶C和第二信使的形成，诱导纤维蛋白溶解酶原活化物的表达，使得基底膜降解，从而促进瘤细胞的迁移。外泌体并作为症状早期诊断技术，应用于与症状进展相关的研究。鼻腔灌洗液外泌体lncRNA芯片

症状细胞来源的外泌体含有与症状进展相关的分子。成都CD63外泌体慢病毒包装

利用蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附分析技术可以对外泌体标志性蛋白质进行定性定量分析。其中蛋白免疫印迹是外泌体的经典表征手段之一，操作时往往需要细胞裂解液作为阴性对照。常用的外泌体标志性蛋白质包括四跨膜蛋白质CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡诱导因子6相互作用蛋白(Alix)等，内参蛋白质可以是肌动蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脱氢酶，阴性对照蛋白可以是阻抑素(PHB，线粒体标志蛋白)或钙联结蛋白Calnexin。在酶联免疫吸附析法中，外泌体裂解液通过固载有抗体的固相基质，随后与检测抗体共孵育。两种方法均存在操作繁琐、耗时长的问题，相比较而言，酶联免疫吸附分析法比蛋白质免疫印迹法更加快速，适用于高通量分析。成都CD63外泌体慢病毒包装